背景描述：
胶原酶（Collagenases），基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP）家族的成员之一，属于内肽酶类，在三螺旋区降解天然胶原，参与结蹄组织的生理和病理周转过程。胶原是动物基质结蹄组织的主要纤维成分。胶原酶可能在肿瘤细胞转移的多个阶段中，对肿瘤细胞侵袭穿透细胞外基质的过程起到促进作用。胶原酶已被支持用于临床治疗杜普征氏掌挛缩（Dupuytren’s contracture），佩罗尼氏病（Peyronie’s disease）和伤口愈合。
胶原酶活性检测方法很多，传统的方法包括胶原酶谱法（Collagen Zymography），该法首先将样本加入含胶原的SDS-PAGE凝胶中电泳，然后在适当缓冲液中复性12-16h，最后染色。当底物被酶降解，在整个黑色的背景中能看到清晰透明的降解条带，从而来判断是否存在胶原酶活性。该方法不仅费力费时，且很可能因复性不完全逆转，导致酶活性降低，结果出现较大偏差。
我司在此推荐来自美国的两款优秀的胶原酶活性检测试剂盒（Collagenase Assay Kits），操作简单方便，且很大程度改善结果的灵敏性和准确性。
一、Rapid Collagenase Assay Kit (I) and (II)（Chondrex, Inc）
1.1 试剂盒优势
含有测定胶原酶活性的所有必要成分包括重组人MMP-8（用作对照）和两种类型的胶原酶活化剂。
不同于抗体为基础的ELISA试剂盒仅能检测酶蛋白的存在，这些试剂盒目的在于测定酶活性。
试剂盒使用FITC标记的可溶性牛I型胶原或II型胶原为底物，只需2h就能完成测试。
比底物凝胶分析法（酶谱法）快10倍，检测灵敏度比放射同位素标记胶原法更灵敏。
1.2 特异性
哺乳动物胶原酶
1.3 工作原理
哺乳动物胶原酶切割胶原分子上的所有三个α链，产生3/4和1/4大小的胶原片段，TCA和TCB，这两个片段的变性温度分别为34-35℃和28-29℃，而所有完整胶原（天然胶原）的变性温度是40℃。因此，35℃下这些切割片段能选择性变性为随机的螺旋构象，能够被一种有机溶剂提取出来。为了缩短变性过程（通常需60min），一种蛋白酶被引入用来进一步消化胶原酶降解后的产物。
1.4 反应步骤
1.5 试剂盒组分
| 组分名称 | 数量 | 规格 | 保存 |
| Reference-recombinant Human MMP-8 | 1 vial | 25µl, 100 units/ml | -80℃ |
| Solution A-FITC-Collagen Dilution buffer | 1 bottle | 10ml | 4℃ |
| Solution B-Sample dilution and reaction buffer | 1 bottle | 50ml | 4℃ |
| FITC-collagen | 1 bottle | 10ml, 1mg/ml in 0.01M acetic acid | -20℃ |
| Activator 1-20X APMA | 1 vial | 1ml | RT |
| Activator 2-Trypsin | 1 vial | 1mg lyophilized | -20℃ |
| Proteinase Inhibitor | 1 vial | 3mg lyophilized | -20℃ |
| Enhancer-Elastase | 1 vial | 1mg lyophilized | -20℃ |
| Stop solution-o-phenanthroline | 1 vial | 1ml 10mM in ethanol | RT |
| Extraction buffer | 2 bottles | 25ml | RT |
| ELISA plate black | 2 each | 96 well | RT |
1.6 试剂盒订购：Chondrex原装正品，欢迎来电咨询，021-54736159，QQ：2971634497。
| 货号 | 名称 | 规格 | 目录价（元） |
| 3014 | Bacterial Collagenase Assay Kit | 100 assays | 5888 |
| 3001 | Rapid Collagenase Assay Kit with Type I Collagen Substrate | 100 assays | 6944 |
| 3002 | Rapid Collagenase Assay Kit with Type II Collagen Substrate | 100 assays | 7472 |
| 3003 | MMP-13 Inhibitor Assay Kit | 100 assays | 8160 |
3001 3002 Rapid Collagenase Assay Kit with Type I Collagen Substrate User Manual
二、Collagenase (Collagen Degradation/Zymography) Assay Kit (Fluorometric)（Biovision, Inc）
2.1 试剂盒优势
快速&灵敏
简单方法测定胶原酶活性和筛选/研究/鉴定胶原酶的潜在抑制剂
包括荧光胶原酶底物和阳性对照
2.2 特异性
哺乳动物胶原酶（包括重组蛋白、组织和细胞裂解液等生物样本）
2.3 检测原理
使用一种杂交方法检测胶原酶活性，引入一种高度淬灭的胶原底物，一旦被合适的胶原酶切割后释放荧光素，能够被传统荧光酶标仪简单定量（Ex/Em=490/520nm）。
2.4 试剂盒组成
| 组分名称 | 规格 | 保存 |
| Collagenase assay buffer | 25ml | -20℃ |
| Cell lysis buffer | 25ml | -20℃ |
| Enzyme positive control | 10µl | -20℃ |
| Collagenase substrate | 1 vial | -20℃ |
| FITC standard（5mM） | 10µl | -20℃ |
2.5 试剂盒订购：Biovision原装正品，欢迎来电咨询，021-54736159，QQ：2971634497。
| 货号 | 名称 | 规格 | 目录价（元） |
| K490 | Collagenase (Collagen Degradation/Zymography) Assay Kit (Fluorometric) | 100 assays | 4875 |
| K792 | Collagenase Activity Colorimetric Assay Kit | 100 assays | 4275 |
| K833 | Collagenase Inhibitor Screening Kit (Fluorometric) | 100 assays | 4425 |
K490 Collagenase (Collagen Degradation/Zymography) Assay Kit User Manual
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归欧宝网址入口 生物/MKBio懋康所有】